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            怎樣冷凍保存蛋白胨細胞

            時間:2020-09-14瀏覽數:276

            蛋白胨細胞的冷凍保存一直是生物科技以及醫療行業的難題,如何克服冷凍過程中的種種弊端,科學合理的冷凍蛋白胨細胞一直是業內人士追求的課題,其實蛋白胨細胞的冷凍技術也并不復雜。

            關于蛋白胨細胞的冷凍保存方法如下:

            1·傳統方法: 冷存管置于4℃10分鐘--->-20℃30分鐘--->-80℃16~18小時(或隔夜)--->液氮槽vaporphase長期儲存。-20℃不可*過1小時,以防止胞內冰晶過大,造成蛋白胨細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

            2·程序降溫:利用已設定程序的等速降溫機以-1~-3℃/分鐘之速度由室溫降至(-80℃以下)-120℃,再放在液氮槽vaporphase長期儲存。適用于懸浮型細胞與hybridoma之保存。

            冷凍前24-48小時更換半量或全量培養基,使細胞處于指數生長期。

            配制冷凍保存溶液(使用前配制):另取一離心管,加入培養基、血清,逐滴加入二甲基亞砜(DMSO)至20%濃度,即制成雙倍的凍存液,置于室溫下待用。

            離心收集培養之細胞,用加血清的培養基重懸起細胞,取少量細胞懸浮液(約0.1ml)計數細胞濃度及凍前存活率。

            取與蛋白胨細胞懸液等量的凍存液,緩慢逐滴加入細胞懸液,并晃動試管,制成細胞凍存懸液(DMSO較后濃度為5~10%),使細胞濃度為1~5×106cells/ml,混合均勻,分裝于已標示之冷凍保存管中,1~2mlial,并取少量細胞懸浮液作污染檢測。嚴密封口后,注明細胞名稱、代數、日期。然后進行凍存。


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